本实验以HPLC法测定乳膏中的醋酸地塞米松含量。复方醋酸地塞米松乳膏是常用抗炎类药物，主药为醋酸地塞米松、薄荷脑、樟脑。为2005版《中国药典》收载，属甲类非处方药（OTC）。在临床上广泛用于局限性搔痒症、神经性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎及慢性湿疹等。
测定制剂中药物含量的关键是采用合适的方法提取到主药，而尽量少带入辅料成份。因此，对于制剂的前处理显得尤为重要。本实验中的前处理主要是从凡士林等基质是提取出醋酸地塞米松。要注意抑菌剂尼泊金乙酯、复方中其它药物成份对测定的影响，保证醋酸地塞米松能很好地分离。
一、实验目的
1 巩固高效液相色谱仪的使用方法
2 熟悉制剂测定的前处理方法
3 掌握用excel计算标准曲线的方法
二、仪器与试药
（1） 仪器 岛津LC-20T 高效液相色谱仪（紫外检测器）；微量注射器（100μl）；微孔滤膜（聚偏氟乙烯膜及混合纤维素酯膜，0.22μm）；过滤装置；XW-80A涡旋混合器；超声波清洗器；容量瓶（100ml, 50ml, 25ml）；吸管；冰块。
（2）试药 醋酸地塞米松对照品；复方醋酸地塞米松乳膏(市售品或自制品)；甲醇（色谱纯）；超纯水。
图7-1 地塞米松化学结构
三、实验方法和操作
1 色谱条件
色谱柱： Kromasil C18 柱（4.6×150mm，5μm）；流动相：甲醇-水体系，比例根据样品情况自行摸索；流速：1.0 ml/min ；紫外检测器；检测波长：240 nm ；柱温：32℃；进样量：20μl
2 溶液的配制
（1）对照品溶液的配制
精密称取醋酸地塞米松对照品约15mg，置合适的容量瓶中，配制成母液。将母液稀释，按一定浓度梯度配制成6-48µg/ml范围内五个不同浓度的对照品溶液。
注意：对照品溶液由老师指定一个实验小组配制一份供大家公用。
（2）供试品溶液
精密称取0.8g乳膏置于50ml或100ml锥形瓶中，加甲醇15ml，以保鲜膜封口，加橡皮筋箍紧，保鲜膜上用针扎几个小孔，置85℃水浴上使融。待乳膏完全熔融后（2~3min左右即可），将锥形瓶置涡旋混合器上振荡混合2min，再置冰浴冷却1.5h。用滤纸过滤，用大约10ml甲醇分三次洗涤锥形瓶和滤器，滤液收集于25ml容量瓶中，加甲醇定容。取适量用0.22um微孔滤膜过滤（用尼龙或聚偏氟乙烯膜，绝不可使用混合纤维素酯膜！），备用。
图7-2 XW-80A涡旋混合器
（3）阴性对照供试品溶液的配制(如果无阴性对照的乳膏，本步骤可不做)
精密称取空白基质0.8g, 按供试品溶液的配制方法制备空白对照溶液备用。精密称取单醋酸地塞米松乳膏0.8g, 按供试品溶液的配制方法制备单醋酸对照溶液备用，以检查其它主药对测定的干扰。
注意：空白基质供试品和单醋酸地塞米松乳膏供试品由老师指定一个实验小组配制一份供大家公用。
3 专属性试验
调节流动相中甲醇与水的比例为90:10、80:20等，取已过滤的供试品溶液适量进样，记录色谱图，观察样品中各色谱峰分离情况。以对照品进样适量，确定醋酸地塞米松的保留时间。在醋酸地塞米松保留时间内，其它杂质峰应不干扰。选择合适的流动相比例作为供试品测量的色谱条件。
4 标准曲线的建立
按上述色谱条件，取对照品液分别进样20μl，记录色谱图。注意：应从低到高的浓度依次进样，否则会引起较大误差。以醋酸地塞米松浓度（c）为横坐标，以样品峰面积 (S)为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线。
用excel软件中“数据分析”项目下的“回归”功能计算标准曲线的相关系数、斜率、截距，获得回归方程。
5 样品的测定
将供试品溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤。取续滤液20μl进样，记录色谱图。每个样品进样3次。根据样品所得的峰面积，以回归方程求算供试品中醋酸地塞米松的浓度。根据其浓度，计算出每克乳膏中含醋酸地塞米松的量。本品醋酸地塞米松标示量为0.75mg/g乳膏。根据上述结果，计算你所测得的样品相当于标示量的百分比。如：测得样品中每克乳膏含地塞米松为0.74mg，则相当于标示量的百分比为0.74/0.75*100%=98.67%。
四、思考题
1 在供试品的样品前处理中,为何要进行冰浴?
2 高效液相色谱为何常选用甲醇和乙腈作为流动相？
4 流动相为何要过滤？供试品进样前为何要过滤？
5 流动相为什么要脱气处理？
6 扳阀进样时有哪些注意事项？
(编写 刘浩然)
